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Sep 04, 2023

インターロイキンの発現

Dipartimento di Gastroenterologia BMC

BMC Gastroenterology volume 23、記事番号: 163 (2023) この記事を引用

310 アクセス

3 オルトメトリック

メトリクスの詳細

抗 B 型肝炎ウイルス (HBV) 治療では、テノホビル ジソプロキシル フマル酸塩 (TDF) とペグ化インターフェロン アルファ (Peg-IFN-α) を併用します。これは、TDF/Peg-IFN-α 単独療法よりも効果的です。 我々は以前、インターロイキン-1β（IL-1β）が慢性B型肝炎（CHB）患者におけるIFN-α治療の有効性と関連していることを示した。 目的は、TDF と Peg-IFN-α の併用療法および TDF/Peg-IFN-α 単独療法で治療された CHB 患者における IL-1β の発現を調査することでした。

HBV に感染した Huh7 細胞を、Peg-IFN-α および/またはテノホビル (TFV) によって 24 時間刺激しました。 CHB患者の前向き募集に関する単一施設コホート研究：未治療のCHB（グループA）、Peg-IFN-α療法と併用したTDF（グループB）、Peg-IFN-α単独療法（グループC）、TDF単独療法（グループD） ）。 正常なドナーを対照として使用した。 患者の臨床データと血液は、0、12、24 週目に収集されました。 早期応答基準に従って、グループ B と C は、早期応答グループ (ERG) と非早期応答グループ (NERG) の 2 つのサブグループに分けられました。 IL-1βの抗ウイルス活性を検証するための、IL-1βによるHBV感染肝癌細胞の刺激。 血液サンプル、細胞培養上清、および細胞溶解物を検査し、さまざまな治療プロトコル、酵素免疫吸着法 (ELISA) および定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応 (qRT-PCR) で IL-1β および HBV の複製レベルの発現を評価します。 ） に使われていた。 統計分析には SPSS 26.0 および GraphPad Prism 8.0.2 ソフトウェアを使用しました。 P 値 < 0.05 は統計的に有意であるとみなされました。

インビトロ実験では、Peg-IFN-α+TFV治療群は単独治療よりも高いIL-1βを発現し、HBVをより効果的に阻害した。 最後に、162 例が観察のために登録されました (グループ A (n = 45)、グループ B (n = 46)、グループ C (n = 39)、およびグループ D (n = 32))、および正常なドナー (n = 20) ）を対照として登録した。 グループB、C、Dの初期ウイルス学的反応率は58.7%、51.3%、31.2%でした。 24週目では、B群(P=0.007)およびC群(P=0.034)のIL-1βは0週目よりも高い値を示した。 グループ B では、IL-1β は ERG の 12 週目と 24 週目に上昇傾向を示しました。 IL-1βは、肝癌細胞におけるHBV複製レベルを有意に低下させた。

IL-1βの発現増加により、CHB患者の早期反応を達成する際のPeg-IFN-α療法と組み合わせたTDFの有効性が高まる可能性がある。

査読レポート

慢性B型肝炎（CHB）は依然として世界中で重大な公衆衛生問題であり、現在世界中で約2億5,000万人が感染しています[1、2]。 そのため、B 型肝炎ウイルス (HBV) の根絶はかなりの課題です [3]。 現在、IFN-α およびヌクレオシド類似体 (NA) が CHB 治療薬として使用されています [4,5,6]。 NA は、CHB 患者の血清中の HBV 関連タンパク質と HBV-DNA を減少させることが示されています [7、8]。 以前の研究によると、テノホビル ジソプロキシル フマル酸塩 (TDF) 療法の使用により、HBV 特異的 CD8+ T リンパ球の細胞傷害活性が大幅に増強されました [9]。 一方、PEG化インターフェロンα（Peg-IFN-α）は、NA単独療法と比較してHBs抗原の血清クリアランスを有意に増強した[10、11]。 よく知られているように、IFN-αは、遺伝子発現とタンパク質翻訳を調節することにより、肝細胞が非細胞溶解性抗ウイルス効果を発揮するように誘導できます[12、13、14、15]。 IFN-αはまた、IL-6、IL-1β、IL-4などのサイトカインを放出する能力により、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、T細胞を活性化し、それによってHBV複製のさまざまな段階で抗ウイルス効果を発揮します[16]。 。 ただし、Peg-IFN-α と TDF の有効性は、単独で使用した場合には限定されます [3]。 TDF と Peg-IFN-α には複数の作用機序があり、併用することで相補的かつ相乗効果を発揮できる可能性のある戦略となります。 ランダム化対照試験では、HBe抗原陰性CHBの場合、TDFとPeg-IFN-αによる48週間の治療は安全であり、TDF単独療法よりも優れた効果があることが判明した[17]。

別の研究によると、非反応群とは対照的に、インターフェロン反応群では、IFN-αで前処理した肝臓組織におけるIL-1β mRNA発現レベルが高かった[18]。 その後、IFN 反応群では非反応群と比較して CHB 患者の末梢血中で IL-1β が高いことが発見されました [19]。 特に、多能性炎症促進性サイトカイン IL-1β が HBV 複製を阻害することが実証されています。 Isorce [20] et al. は、さまざまなサイトカインで肝細胞を刺激したところ、IL-1βがHBV-DNAを減少させ、他のものよりも高い抗HBV活性を示すことを発見しました。 さらに、ある研究では、CHB 患者の血清 IL-1β レベルが HBV に感染していない患者よりも高いことが示されました [21]。 したがって、IL-1βは、Peg-IFN-αと組み合わせたTDFの抗ウイルスプロセスにおいて重要な因子を果たしていると仮定することができる。

本研究では、健康な CHB と未治療の CHB の間の IL-1β 発現の差異が分析されました。 同時に、コホート研究を通じて、Peg-IFN-αとTDFを併用して治療したCHB患者およびPeg-IFN-α/TDF単独で治療したCHB患者におけるIL-1βの発現レベルと変化傾向、および早期ウイルス学的奏効率が観察されました。 。 さまざまな治療計画における IL-1β の発現レベルおよび IL-1β の抗 HBV 活性も、インビトロ実験を通じて評価されました。 本研究は、CHB の治療における Peg-IFN-α と組み合わせた TDF の病因の深い理解と、CHB の新しい治療法の探索に重要な基盤を提供します。

Huh7 細胞は Wei Xue 研究グループから寄贈され、1% ペニシリン/ストレプトマイシンおよび 10% ウシ胎児血清 (FBS) (Excell) を添加したダルベッコ改変イーグル培地 (DMEM) (GIBCO) を用いて 5% 培地、37 °C で培養されました。 CO2インキュベーター。 HBV 1.3 mer WT によってトランスフェクトされた Huh7 細胞を、20 µmol/L テノホビル (TFV) (Meilunbio、中国、カタログ番号 MB1386-1、TFV は TDF 抗ウイルス薬の主成分です) + 1000U/mL Peg-IFN-α-2b で刺激しました。 (Tebao、中国)、1000U/mL Peg-IFN-α-2b、20μmol/L TFV、または 0、100、200ng/mL IL-1β (BBI、中国) 24 時間。 PBSを対照として使用した。 HepG2.2.15 細胞は私たちの研究グループで保管され、1% ペニシリン/ストレプトマイシン、10% FBS、および 400ug/mL G418 (Meilunbio、中国) を添加した DMEM によって培養されました。 HepG2.2.15 細胞を、G418 の非存在下で IL-1β で 48 時間刺激しました。

HBV 1.3 mer WT プラスミドは JISSKANG (山東省、中国) を介して合成し、対応する空のプラスミドを陰性対照として使用しました。 トランスフェクションは、リポフェクタミン３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国）を製造業者の指示に従って使用して実施した。

本研究は、CHB 治療のさまざまなレジメンにおける初期のウイルス学的反応率と IL-1β の動的傾向を決定することを目的とした観察コホート研究でした。 中国肝臓学会によるCHBの予防と治療に関する2019年のガイドラインで定義されているCHBの診断基準は、HBVの持続感染によって引き起こされる肝臓の慢性炎症性疾患です。 個々の治療計画をタイムリーに最適化することは、CHB の臨床治癒を達成し、肝硬変や肝がんの発生率を下げるために不可欠です。 前向き募集は、2021年6月から2022年9月までに重慶医科大学第一付属病院感染症科の外来診療に参加した18歳から60歳までのCHB患者によって実施された。合計171例が観察のために登録され、9例が観察のために登録された。ケースは除外されました。 最終的に、合計 162 例が研究に含まれ、4 つのグループに割り当てられました。グループ A (n = 45) - 未治療の CHB。 グループ B (n = 46) - TDF と Peg-IFN-α の組み合わせで治療された CHB。 グループC (n = 39) - Peg-IFN-αのみで治療したCHB。 グループ D (n = 32) - CHB を TDF のみで治療。 さらに、対照群として 20 人の健康なドナーが募集されました。 この研究はヘルシンキ宣言に従って実施され、すべての患者は研究に参加する前にインフォームドコンセントを提供し、署名しました。

(1) 組み入れ基準

この研究には、2019年中国B型肝炎予防・治療ガイドラインで定義されたCHBの診断基準を満たし、血清HBs抗原およびHBe抗原が陽性、またはHBe抗原が陰性である18～60歳の患者が参加した。 患者はまた、HBV-DNA検査で陽性または陰性が得られ、Peg-IFN-αおよびTDFの使用に同意した。

(2) 除外基準

HIV、HEV、HCV、その他の同時感染などの他のウイルス感染症、肝硬変の末期症状、肝不全、肝がんなどの疾患、心血管疾患などの重篤な慢性疾患を患っている患者は研究から除外された。 、泌尿器系、結合組織、血液系の患者は、Peg-IFN-αの使用中に重篤な有害事象を経験したか、インフォームドコンセントを提供しませんでした。

(3) 早期対応の基準

早期奏効は、24 週間の治療期間中の HBV-DNA > 2 log10 IU/mL の減少、または HBs 抗原の急速な減少 (12 時で HBsAg < 200 IU/mL、または > 1 log10 IU/mL の減少) と定義されました。または 24 週間）。

(4) 早期対応しない基準

非反応は、24週でHBV-DNAが2 log10 IU/mL未満減少した患者、または12週または24週でHBs抗原が1 log10 IU/mL未満減少した患者として定義された。

グループ A の患者は抗 HBV 療法を受けていませんでした。 グループBの患者には、180μg/週のPeg-IFN-α-2bおよび300mg/日のTDFが投与された。 グループCの患者には、180μg/週のPeg-IFN-α-2bを投与した。 グループ D の患者には 300 mg/日の TDF が投与されました。 健康なドナーを対照として使用した。

患者は０、１２、２４週目に観察された（患者がＨＢｓＡｇの血清学的変換を経験したとき、追跡調査は中止された）。 血液サンプルと以下の情報が収集されました。 (1) 各患者は、EDTA を含む抗凝固剤チューブを使用して末梢血の 4 ml サンプルを提供しました。 次に、サンプルを 3000 rpm、4 °C で 20 分間遠心分離し、血漿を収集しました。 末梢血単核球 (PBMC) を分離し、RNA を抽出しました。 血漿および RNA サンプルは -80 °C で保存されました。 (2) B型肝炎の家族歴、薬歴、アレルギー歴などの基本的な臨床情報および疫学歴。 (3) 定期的な血液 (WBC および PLT) および肝機能 (ALT、AST、TBIL) を含む血液検査。 (4) ウイルス学的指標：血清HBV-DNA、HBsAg、HBeAg（HBV-DNAは20IU/mL未満の場合は0IU/mLとして発現、HBsAgは25,000IU/mL以上の場合は25,000IU/mLとして発現、算出） ; HBsAg は、< 0.05 IU/mL の場合、0 IU/mL として表現および計算されました。 （5）IL-1β濃度およびIL-1β mRNAの相対発現レベル：血漿中のIL-1β濃度はELISAキットを使用して検出され、一方、PBMCではIL-1β mRNAはqRT-PCRによって測定されました。 (6) 画像データ: 上腹部のカラードップラー超音波検査/CT スキャン/MRI 強調スキャンおよび肝臓一過性エラストグラフィー。

全細胞ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ ｐｌｕｓ（Ｔａｋａｒａ、Ｂｉｏ）を使用して抽出した。 逆転写は、primeScriptTMRT 試薬キット (Takara、カタログ番号 RR047A) を使用して実行されました。 定量的リアルタイム PCR 反応は、SYBR® Premix Ex Taq™ Kit (Takara、カタログ番号 RR820A) を使用するシステム (Biorad) で実行されました。 遺伝子発現はβ-アクチンと比較して正規化し、2-ΔΔCt 法を利用して計算しました。 プライマーは次のとおりでした: β-アクチン、フォワード 5'-CAT GTA CGT TGC TAT CCA GGC-3'、リバース 5'-CTC CTT AAT GTC ACG CAC GAT-3'。 IL-1β、順方向 5'-ATG ATG GCT TAT TAC AGT GGC AA-3'、逆方向 5'-CTC CTT AAT GTC ACG CAC GAT-3'。 Pg RNA、順方向 5'-GCC TTA GAG TCT CCT GAG CA -3'、逆方向 5'- GAG GGA GTTC TTC TTC TAG G -3'。 HBV RNA、順方向 5'-ACC GAC CTT GAG GCA TAC TT-3'、逆方向 5'-GCC TAC AGC CTC CTA GTA CA -3'。

上清中のHBsAgおよびHBeAgをELISAキット(Kehua Biotech、中国)を使用して測定した。 IL-1βのタンパク質発現レベルもELISAキット(J&L Biological、中国)を使用して測定した。

Ficoll-Paque Plus (Cytiva、カタログ番号 17,144,003) を患者の血液サンプルに添加し、密度勾配遠心分離によって PBMC を分離しました。

すべての変数は、Shapiro-Wilk 検定とヒストグラムによって正規性について検定されました。 定量的変数は、平均±標準偏差、中央値 (IQR)、またはカウント (%) として表されました。 データの統計分析とグラフ作成には、SPSS 26.0 および GraphPad Prism 8.0.2 ソフトウェアを使用しました。 2 つのデータセットが正規分布に従っている場合は、t 検定が使用されました。 それ以外の場合は、Mann-Whitney U 検定が使用されました。 複数のデータセットを比較する場合、データが正規分布に従っている場合は、ANOVA または反復測定 ANOVA 分析が使用されました。 それ以外の場合は、フリードマン M 検定が使用されました。 クラスカル-ウォリス検定は、非正規分布を使用した 3 つの独立したサンプルに対して使用されました。 速度の比較は、Pearson χ2 検定と χ2 検定を使用して検定されました。 以下で示されるように、AP 値 < 0.05 は統計的に有意であるとみなされました: *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001、****P < 0.0001。

Peg-IFN-αおよびTFV/Peg-IFN-α単独療法と組み合わせたTFVにおけるIL-1βの発現を調べるために、Huh7細胞にHBV 1.3-mer WTをトランスフェクトし、非存在下(PBS)または存在下で24時間培養した。 TFV 20μmol/L、Peg-IFN-α 1000U/mL [19]、および 20μmol/L TFV + 1000U/mL Peg-IFN-α。 細胞におけるIL-1β mRNA、HBV RNA、およびPg RNAの発現レベルは、qRT-PCRによって検出されました。 ELISA を使用して、細胞培養上清中の IL-1β、HBsAg、および HBeAg を検出しました。 図 1 (b、c、e、f) に示すように、TFV + Peg-IFN-α および Peg-IFN-α の単独療法は、TFV 単独療法と比較して、HBV RNA、Pg RNA、HBsAg、および HBeAg を有意に減少させました (P < 0.0001)。 TFV+ Peg-IFN-αおよびPeg-IFN-α単独療法群におけるIL-1β mRNAおよびタンパク質の発現レベルは、TFV単独療法群よりも高かった。 注目すべきことに、TFV + Peg-IFN-αグループは、Peg-IFN-α単独療法グループよりも高いレベルのIL-1β mRNAおよびタンパク質を発現しました（図1(a、d)）。 要約すると、TFV + Peg-IFN-α の治療効果は、Peg-IFN-α または TFV 単独療法群よりも優れており、IL-1β の発現を調節することにより抗ウイルス能力を増強する可能性があります。

TFV + Peg-IFN-α は IL-1β の発現を促進し、HBV 複製を阻害しました。Huh7 細胞を HBV 1.3 mer WT でトランスフェクトし、20 µmol/L TFV、1000 U/mL Peg-IFN-α、および 20 µmol で処理しました。 /L TFV + 1000 U/mL Peg-IFN-α、24 時間

(ac) 細胞を採取し、qRT-PCR に供しました。 (df) 上清 IL-1β、HBsAg、および HBeAg のレベルを ELISA によって検出しました。 結果は平均値 ± SD、*P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001、****P < 0.0001 として表示されます。

本研究では、171 人の CHB 患者が募集され、血液サンプルがなかったため 9 例が除外されました。 最終的に、162 人の CHB が登録され、グループ A に 45 例、グループ B に 46 例、グループ C に 39 例、グループ D に 32 例、対照群に 20 例が含まれました。 グループ B、C、および D の患者は、HBsAg 血清学的変換が起こらない限り 24 週間追跡されました。 フォローアップ手順を図 2 に示します。

追跡調査プロセスに登録されたCHB患者

以前、本著者によって収集された以前のゲノムオリゴマイクロアレイデータの再評価により、IFN-α前処理肝組織におけるIL-1β応答者のmRNAレベルが非応答者よりも有意に高いことが明らかになった[19]。 CHB 患者における IL-1β 発現をさらに評価するために、健康な個人および未治療の CHB 患者から血液サンプルを採取し、ELISA を使用して血漿中の IL-1β レベルを測定し、qRT-PCR を使用して PBMC 内の IL-1β mRNA を評価しました。 対照群と比較して、A群のIL-1βのmRNAおよびタンパク質レベルは有意に高かった(図3(ab))(P<0.05)。 表1に示すように、A群と対照群との間で、B型肝炎、ALT、AST、TBil、WBC、およびPLTの年齢、性別、家族歴に有意差はありませんでした（P > 0.05）。

さまざまなグループにおけるIL-1βの発現と早期反応率。 (a) グループ A および対照グループの IL-1β mRNA を、PBMC の qRT-PCR によって測定しました。 (b) 血漿中のELISAを使用して、グループAおよび対照グループのIL-1βを測定した。 (c) グループ B、C、および D の初期のウイルス学的応答率

表に示すように、0週時点では、B群、C群、D群の患者間で、年齢、性別、B型肝炎の家族歴、AST、ALT、TBIL、WBC、およびPLTに有意差はなかった(P > 0.05)。 １２週および２４週では、Ｄ群と比較して、Ｂ群およびＣ群のＡＬＴおよびＡＳＴが有意に増加し、ＷＢＣおよびＰＬＴが有意に減少した（Ｐ＜０．０５）。 グループ B と C では、12 週と 24 週の ALT と AST は 0 週のものより有意に高く、WBC と PLT は 0 週のものより有意に低かった (P < 0.05)。 グループ D では、0、12、および 24 週の ALT、AST、DBIL、WBC、および PLT に有意差はありませんでした。

24週間の追跡調査後、グループBの4人の患者はHBs抗原SCを達成し、24週時点でのHBs抗原レベルの中央値（四分位）は1001.3（10.9、2852.7）IU/mlで、ベースラインレベルの1718.4より有意に低かった（ 675.3、5945.1) IU/ml (P < 0.05)。 C グループでは、7 人の患者が HBsAg SC を達成し、24 週時点での HBsAg レベルの中央値 (四分位) は 48.7 (0.98、989.4) IU/ml で、ベースライン レベルの 208.1 (46.8、3451.6) IU/ml よりも大幅に低かった。 、しかし、12週間のレベルとの有意差はありませんでした（P>0.05）。 グループ D の患者はいずれも HBsAg SC を達成せず、0、12、および 24 週の間で HBsAg レベルに有意差はありませんでした (表 3)。 さらに、B 群患者における HBV-DNA (-) 達成率は、0 週目よりも 12 週目と 24 週目の方が有意に高かった (P < 0.05)。 同様に、HBV-DNA (-) を達成したグループ C の患者の割合は、0 週目よりも 12 週目と 24 週目の方が有意に高かった (P<0.05)。 D 群では 0、12、および 24 週目に HBV-DNA (-) を達成した患者の割合に有意差はありませんでした (P > 0.05)。 グループB、C、およびDの初期ウイルス学的反応率は、それぞれ58.7％（27/46）、51.3％（20/39）、および31.2％（10/32）であり、有意差はありませんでした（図3c） ）。 しかし、早期ウイルス学的奏効率（EVRR）は、TDF/Peg-IFN-α単独療法群（グループCおよびD）と比較して、グループB（Peg-IFN-αと併用したTDF）の方が高かった。

24週目のCHB患者の血漿におけるグループBのIL-1βの発現は、0週目よりも有意に高かった(P=0.007)。 同様に、グループ C の 24 週目の血漿 IL-1β レベルは、0 週目よりも有意に高かった (P = 0.034)。 しかし、グループ D の IL-1β は、0、12、および 24 週間で有意な差はありませんでした (P > 0.05)。 0、12、および24週間の時点で、グループB、C、およびDの間でIL-1βレベルに統計的に有意な差はありませんでした（図4）。

グループ B、C、および D における IL-1β 発現。血漿は CHB から収集されました (グループ B の患者 46 名、グループ C の患者 39 名、およびグループ D の患者 32 名を含む)。 ELISA を使用して、血漿中の IL-1β レベルを測定しました。 結果は中央値 (IQR) として表示されます。 * P < 0.05、**P < 0.01

グループ B と C は、早期対応の基準に従って ERG と NERG に分けられました。 グループBでは、NERGにおけるIL-1βの発現は、それぞれ0wおよび12wでERGよりも高かった（図5a）。 ERGにおけるIL-1βの発現は治療中に増加傾向を示し、24週目のIL-1βの発現は0週目よりも有意に高かった(P<0.05)。 NERG における IL-1β の発現は、0 週目に比べて 12 週目と 24 週目で有意に増加しましたが (P < 0.05)、24 週目の IL-1β 発現は 12 週目と比較して低下傾向を示しました。 グループ C では、0、12、および 24 週間で、IL-1β 発現応答グループと NERG の間にそれぞれ有意差はありませんでした (P > 0.05)。 ERGおよびNERGにおけるIL-1βの発現は、治療の進行とともに増加傾向を示しましたが、その差は統計的に有意ではありませんでした。 (図5)

グループBおよびCのERGおよびNERGにおけるIL-1βの発現(ac)。 グループBのERGおよびNERGにおけるIL-1βの発現。 (df) C 群の ERG および NERG における IL-1β の発現;*P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001、****P < 0.0001

IL-1βの潜在的な抗ウイルス活性を調べるために、Huh7細胞にHBV 1.3mer WTをトランスフェクトし、IL-1β（0～200 ng/ml）で24時間処理しました。 IL-1βによる処理により、HBVでトランスフェクトされたHuh7細胞におけるHBV RNA、Pg RNA、HBsAg、およびHBeAgのレベルが低下した（図6a〜d）。 さらに、IL-1βは、安定したHBV発現を有するHepG2.2.15細胞におけるHBV複製のレベルを低下させることが判明した（図6e～h）。 この結果は、インビトロ実験を通じて肝細胞におけるIL-1βの抗HBV活性を確認した。

肝癌細胞におけるIL-1βの抗HBV活性。 (ad) Huh7 細胞を HBV 1.3 mer WT プラスミドでトランスフェクトし、IL-1β (100 および 200 ng/ml) の非存在下 (PBS) または存在下で 24 時間培養しました。 （eh）HepG2.2.15細胞を0および200ng/mlのIL-1βで48時間刺激した。 細胞を採取し、RT-qPCRに供しました。 上清中のHBsAgおよびHBeAgをELISAを用いて分析した。 *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001、****P < 0.0001

CHBは制御可能ですが、HBVを排除することは依然として課題です。 現時点では、機能的治癒が最適な結果です。 IFN-αとNAはCHBの第一選択薬です。 TDF は、抵抗力が低い状態で肝臓がんの発生率を減少させ [22、23]、免疫機能に影響を与えることも発見されています。 HBV 感染症の治療の難しさは主に cccDNA によって引き起こされます [11]。 これまで、IFN-αは、免疫調節を通じて慢性HBV感染症患者の肝細胞核内の持続的cccDNAを標的とする唯一の治療選択肢であった[24]。 したがって、ヒトの免疫応答を改変することにより、TDF と Peg-IFN-α の併用は、HBV の宿主クリアランスを増加させ、体の抗ウイルス免疫応答機能を再確立する上で、単独療法よりも有益である可能性があります。 本著者らによる以前の研究では、IL-1βが抗ウイルス効果と潜在的に関連していることが判明した。 本研究では、まず in vitro 実験が行われました。 図1に示すように、TFV、Peg-IFN-α、およびTFVとPeg-IFN-αの組み合わせを使用して、HBVに感染したHuh7細胞を刺激するためのin vitro実験を実施した。 その結果、Peg-IFN-α/TFV単独療法群と比較して、TFV+Peg-IFN-α療法群でIL-1βの発現レベルが高いことが明らかになった。 同時に、HBV モデルの Huh7 感染を通じて投与される TFV + Peg-IFN-α および Peg-IFN-α 単独療法による治療は、HBV RNA および Pg RNA のレベルを大幅に抑制することが明らかになりました。 結論として、TDF + Peg-IFN-α は CHB 患者における IL-1β の発現増加を促進し、おそらく HBV 複製のより効果的な阻害に関連していると推測できます。

本研究では、未治療の CHB 患者 45 名と健常人 20 名が登録され、CHB 患者の IL-1β 発現は健常者よりも有意に高いことが判明しました。 本研究の目的は、Peg-IFN-αまたは単独療法によるTDFを受けたCHB患者におけるIL-1βの発現を評価することであった。 合計 117 人の CHB 患者をグループ B (TDF + Peg-IFN-α)、グループ C (Peg-IFN-α)、およびグループ D (TDF) に分類しました。 その結果、グループBとCでは、治療開始後にWBC、PLT、AST、ALTに異常が見られたが、これはおそらく免疫調節性および炎症促進性サイトカインの発現によるものであることが明らかになった。 Peg-IFN-α単独療法およびPeg-IFN-αを含むTDFは、TDF単独療法と比較して、HBs抗原およびHBV-DNAレベルの低下においてより効果的でした。 EVRRは、グループCおよびDよりもグループBの方が高かった。記載されたデータによると、Peg-IFN-αと併用したTDFは、Peg-IFN-α/TDF単独療法よりも優れた抗HBV効果を示した。 続いて、追跡期間中の IL-1β 発現の変化を評価しました。 結果は、24 週間のグループ B および C の IL-1β レベルがベースラインよりも有意に高かったことを示しています。 注目すべきことに、IL-1β発現の増加は、Peg-IFN-α単独療法群よりも併用療法群でより顕著であった。 さらに、グループ C ではそれぞれ 0、12、および 24 週間で IL-1β レベルに有意差はありませんでした。 Peg-IFN-α治療と組み合わせたTDFは、ERGおよびNERGにおけるIL-1βの発現増加を促進する可能性があるが、NERGにおけるIL-1βの発現は12週間後に減少し、それが早期の非治療の理由でもある可能性がある。 CHB患者における反応。 Peg-IFN-α単独療法群ではIL-1βの有意な増加は観察されなかった。 したがって、単独療法と比較して、Peg-IFN-αと組み合わせたTDFのより高い有効性は、患者におけるIL-1βの発現の促進に関連している可能性がある。 間違いなく、IFN-α は IL-1β の増加を促進する可能性があります [16]。 以前に報告されているように、HBV は p-STAT1 と p-P65 の活性化を阻害することにより、炎症体の活性化と IL-1β の産生を阻害する可能性があります。 HBV が阻害されると、IL-1β の発現が増加します [19]。 したがって、TDF と Peg-IFN-α の併用治療は、HBV の複製をより効果的に阻害できますが、炎症経路に対する HBV の阻害効果は弱まり、IL-1β の分泌に有益です。 IL-1βは、TDFおよびPeg-IFNαがHBVを抑制するのを助けます。 さらに、インビトロ実験の結果は、IL-1βの強力な抗HBV活性を示している。 ある研究では、IL-1βが、特定の免疫遺伝子の発現を活性化し[25、26]、また感染の主要部位へのリンパ球の動員を促進することにより、B型肝炎ウイルスやC型肝炎ウイルスなどの攻撃的な病原体を制御する重要な因子であることが判明した[27、28]。 ]。 したがって、次のステップは、IL-1β 抗 HBV 経路を調査することになります。

B 群の IL-1β の発現は、0 週目の初期非反応群よりも比較的低かったが、これはおそらくウイルス量が高く、HBV 関連タンパク質の発現上昇、および HBsAg > 3000IU/mL の存在によるものと思われる。慢性 B 型肝炎 (CHB) 患者における HBeAg (+) および HBV-DNA (+)。これにより、ベースライン IL-1β 発現が上昇する可能性があります。 TDF と Peg-IFN-α の連続治療は、そのような患者における HBV の完全な除去により良い効果をもたらす可能性があります。

TDF と組み合わせた慢性 B 型肝炎の治療における Peg-IFN-α のメカニズムをより深く理解することで、CHB を治癒するための新しい治療戦略の発見が促進されます。 本データによれば、Peg-IFN-αとTDFの併用療法は、Peg-IFN-α/TDF単独療法よりも高いウイルス学的応答率とIL-1β発現の増加を示した。 CHBの治療においてPeg IFN-αと組み合わせたTDFは、IL-1βの発現を増加させることにより抗ウイルス効果を高める可能性がある。 記載された方法は、CHB 患者、特に無反応患者に対する新しい治療アプローチとして機能する可能性があります。 この方法により、初期段階での治療効果の評価が可能になり、個々の治療計画をタイムリーに調整できるようになり、合併症のリスクを軽減できる可能性があります。 今回の発見は、HBVの制御と排除におけるTDF + Peg-IFN-αの重要な役割を裏付け、B型肝炎ウイルスがどのように自然免疫系と相互作用するかを明らかにするものである。 重大な利点にもかかわらず、本研究はより多くの潜在的な患者集団と長期にわたる追跡調査の状況で検証される必要がある。

現在の研究中に生成および/または分析されたデータセットは、患者のプライバシーを保護するため公開されていませんが、合理的な要求に応じて責任著者から入手できます。

ヌクレオシド類似体

ペグ化インターフェロンα

B型肝炎ウイルス

慢性B型肝炎

インターロイキン 1 ベータ

テノホビル ジソプロキシル フマル酸塩

アラニントランスアミナーゼ

アスパラギン酸トランスアミナーゼ

総ビリルビン

白血球

血小板

B型肝炎表面抗原

B型肝炎ウイルス デオキシリボ核酸

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リファレンスをダウンロードする

この研究にご協力いただきました Wei Xue に感謝いたします。 Peg-IFN-α-2b を提供してくださった Xiamen Tebao Biological Engineering Company に感謝します。 私たちは、チームメンバーの Haiying Luo、Guili Tan、Yadi Li、Bo Qin の素晴らしい協力と忍耐強いサポートに感謝したいと思います。

この研究は、中国重慶自然科学財団 (cstc2020jcyj-msxmX0221) の支援を受けました。

感染症科、重慶市感染症および寄生虫病重点研究所、重慶医科大学第一附属病院、No. 1 Youyi Road, Yuzhong District, Chongqing, 400016, China

Xiaoxia Hu、Haying Luo、Guili Tan、Yadi Li、Bo Qin

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Xiaoxia Hu は細胞実験を完了し、データを収集して分析し、データを解釈して、作業の草案を作成しました。 Haiying Luo、Guili Tan、Yadi Li は症例データの収集に参加しました。 Bo Qin はプロジェクトを設計し、原稿を修正し、提出物を承認しました。 著者全員が原稿の最終版を読んで承認しました。

ボー・チンへの対応。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

すべての患者は同意を示し、研究に参加するためのインフォームドコンセントフォームに署名しました。 この研究はヘルシンキ宣言の原則に従って実施され、重慶医科大学第一付属病院の倫理委員会（2022-8）によって承認された。

適用できない。

シュプリンガー ネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

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転載と許可

Hu, X.、Luo, H.、Tan, G. 他ペグ化インターフェロンαとフマル酸テノホビルジソプロキシルおよび単剤療法を組み合わせて治療した慢性B型肝炎患者におけるインターロイキン-1βの発現。 BMC Gastroenterol 23、163 (2023)。 https://doi.org/10.1186/s12876-023-02812-5

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受信日: 2023 年 2 月 9 日

受理日: 2023 年 5 月 10 日

公開日: 2023 年 5 月 19 日

DOI: https://doi.org/10.1186/s12876-023-02812-5

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